2.植物组织培养（植物克隆的技术基础）

（1）理论基础：植物细胞全能性，即植物体的每个生活细胞都具有遗传上的全能性，因而都具有发育成完整植株的潜能

（2）过程：

①离体植物细胞、组织或器官（外植体）→获得愈伤组织→诱导形成试管苗→新植株

PS外植体选取形成层（分生组织）部分易于诱导形成愈伤组织

A.培养条件：

首先是离体培养（生物体内细胞中基因在特定时间和空间条件下选择性表达，细胞分化为不同组织、器官，故无法表现出全能性）

半/固体培养基（固体为例）

a.营养物质：水、无机盐、蔗糖、维生素、有机添加剂（氨基酸、琼脂凝固剂等）

b.植物激素/生长调节剂（适当浓度配比诱导分化出芽/根的顶端分生组织/花）

——CTK中等量IAA少量诱导脱分化，CTK、IAA比例合适诱导根芽分化

c.无菌条件（外植体70%酒精消毒、器械高温蒸汽灭菌）——杂菌争夺产毒

d.适宜的pH、温度和渗透压

B.光照：若外植体是（带叶）茎段，不经历脱分化再分化，组培全过程均需要光照；

若外植体是非光合作用部位（如胡萝卜块根），再分化成芽后光照

C.试管苗移栽前需炼苗（草炭土/蛭石，逐渐降湿）

D.愈伤组织：排列疏松的高度液泡化的活的薄壁细胞团

②外植体→愈伤组织→摇床液体悬浮培养分散成单细胞→胚状体→人工种子

PS 单细胞植物克隆，类似受精卵的卵裂、分化、器官发生、形态建成

单细胞：细胞质丰富、液泡小、细胞核大（胚性细胞特征）

③酶解细胞壁→原生质体培养→新植株

（2）用途：微型繁殖、制造人工种子（胚状体阶段）、单倍体育种、

作物脱毒（植物分生组织细胞，分裂旺盛病毒极少Cf抗病毒）、在培养基中加入不同浓度的氯化钠溶液，可诱发和筛选抗盐植株

细胞产物工厂化生产（愈伤组织阶段已可，试管培养苗、细胞培养反应器也可）

（3）长期培养后的全能性下降原因：染色体畸变、核变异、非整倍体产生；细胞或组织中激素平衡被打破；细胞对外源生长物质的敏感性改变；形成缺乏成胚性的细胞系

——植株在多次继代培养后，会逐渐丧失细胞全能性的表达能力

3.原生质体融合/植物体细胞杂交（不同植物）

获得原生质体：在甘露醇溶液环境（较高渗透压）中用纤维素酶和果胶酶混合液处理用网筛过滤原生质体到离心管内，离心后收集沉淀物，用等渗溶液洗涤；检验原生质体是否符合要求：依据渗透作用原理，采用低渗胀破法（见比较表格）

4.植物细胞工程：培养植物细胞（包括原生质体），借用基因工程技术将外源DNA导入受体细胞或通过细胞融合将不同源的遗传物质重新组合，再通过细胞培养，获得具有特定性状的植株

C细胞工程：细胞培养和细胞融合（若基因型不同为细胞杂交）

——基因定位：利用细胞杂交中染色体丢失与特定基因产物的对应关系